A Multiplex PCR Assay for Simultaneous Detection of Giardia duodenalis, Cryptosporidium parvum, Blastocystis spp. and Enterocytozoon bieneusi in Goats

  十二指肠贾第虫（Giardia duodenalis）、微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）、芽囊原虫（Blastocystis spp.）和毕氏肠微孢子虫（Enterocytozoon bieneusi）是四种常见的人兽共患寄生虫，通常与宿主的严重腹泻和肠道疾病相关。本研究建立了一种多重PCR检测方法，用于同时检测山羊粪便样本中这四种人兽共患原虫，并评估其检测效果。根据从GenBank获取相应病原的保守基因序列设计特异性引物，并优化PCR反应条件。从130个临床样本中提取基因组DNA，并开展单病原PCR和多重PCR检测。多重PCR成功扩增出不同病原的特定基因片段（贾第虫：1400 bp；微小隐孢子虫：755 bp；芽囊原虫：573 bp；毕氏肠微孢子虫：314 bp）。该检测方法的灵敏度为≥102拷贝的病原DNA，且对其他常见肠道寄生虫呈阴性，表明其具有较高特异性。在临床样本检测中，贾第虫、微小隐孢子虫、芽囊原虫和毕氏肠微孢子虫的阳性检出率分别为23.08%（30/130）、24.62%（32/130）、41.54%（54/130）和12.31%（16/130），皆与单病原PCR的检测结果一致。以单病原PCR检测结果为金标准，多重PCR法对粪便样本中贾第虫、毕氏肠微孢子虫、微小隐孢子虫和芽囊原虫的DNA检测灵敏度、阳性预测值及预测值均为100.00%。本试验建立的多重PCR方法显示出较高的特异性、敏感性、准确性和成本效益，同时也为山羊粪便样本中该四种原虫的快速检测和流行病学调查提供了技术支持。

  中国疾控中心寄生虫病所洪炀研究员和佛山科学技术学院的陈胜锋教授为本文的并列通讯作者，该文发表于Veterinary sciences  2024, 11(9), 448. 

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