Development and evaluation of fluorescent recombinase polymerase amplification (RPA)-based method for rapid detection of Necator americanus

  美洲钩虫是引起人类钩虫感染的主要物种。尽管预防策略取得了进展，但轻度感染病例仍然存在，这突显了改进检测技术的必要性。重组酶聚合酶扩增（RPA）是一种等温分子诊断方法，其灵敏度、检测速度、便携性等优势在检测各种病原体方面已获得广泛应用。本研究成功开发了一种针对美洲钩虫ITS2基因的荧光RPA检测方法。扩增片段长度为237bp。实现了优化条件，最低检测限为1fg/μL，且与华支睾吸虫、日本血吸虫、肝片形吸虫、蛔虫、蛲虫及十二指钩虫等均无交叉反应。在实验室验证中，与Kato Katz相比，荧光RPA检测显示了100%的灵敏度（30/30）和100%的特异性（11/11），与半巢式PCR相比，荧光RPA检测显示出了100%的敏感性（29/29）和91.7%的特异性（11/12）。在对现场采集的人粪便样本的验证中，与Kato Katz相比，荧光RPA检测的灵敏度为90.0%（36/40），特异性为91.1%（225/247）。与半巢式PCR方法相比，荧光RPA方法的灵敏度为100%（34/34），特异性为90.5%（229/252）。总之，本研究建立的基于荧光RPA技术的美洲钩虫快速检测方法具有显著优势和广阔的应用前景。它具有高灵敏度、高特异性和快速操作程序的特点，使其在初级卫生保健机构的大规模检测和使用中具有很高的实用性。该方法在美洲钩虫疾病控制和研究领域具有广阔的应用潜力和巨大的发展前景。

  该论文第一作者为中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所（国家热带病研究中心）硕士研究生梁家瑞和闫书宁（并列第一），郑彬研究员、徐斌主任技师和内蒙古大学胡薇教授为并列通讯作者。论文发表在PLoS Neglected Tropical Diseases上。

  附件：全文下载