间接红细胞凝集试验（IHA）

一、原理    IHA是以红细胞为载体，吸附预先制备的特异性抗原或抗体（此即致敏作用，吸附有抗原或抗体的红细胞称致敏红细胞）作为试剂，检测标本中的相应抗体或抗原的一种血清学方法。其特点是抗原与其相应抗体之间的特异性反应，借红细胞凝集现象表现出来。这是一种定性的检测方法，根据凝集出现与否判定阳性或阴性结果，也可作半定量检测，即将标本作一系列对倍稀释后进行反应，以出现阳性反应的最高稀释度作为滴度。

二、操作方法   

1. 在微量血凝板上将被检样品编号写上。

2. 各排第一孔，用微量稀释器加稀释液（pH7.2PBS内含1％正常兔血清）0.09ml，以后各排孔加稀释液0.05ml。

3. 各排第一孔各加被检血清0.01ml，然后用稀释器进行倍比稀释，最后弃去0.05ml，每孔含稀释血清0.05ml。

4. 每孔各加2％致敏红细胞悬液0.01ml。

5. 将血凝板置振荡器上振荡2～3min，或用手充分摇匀，覆以盖板，静置2～4h后读取结果。

6. 若用稀释棒作倍比稀释：A. 各排第一孔用微量滴管加被检血清（1:10）0.05ml，以后各排孔加稀释液0.025ml；B. 用稀释棒做倍比稀释；C. 将血凝板放于振荡器上，在振荡同时用微量滴管滴加致敏红细胞，每孔0.025ml，其余同上。

7. 对照设置：检测抗体时每次应设兔血清盐水对照，已知阳性和阴性血清对照。检测抗原时兔血清盐水对照，已知抗原对照，正常球蛋白致敏红细胞对照。

三、结果判断及标准 

“＋＋＋＋”红细胞形成明显凝集块，布满全孔底，甚至出现卷边。

“＋＋＋”红细胞出现薄层凝块，面积较上者小。

“＋＋”红细胞部分沉积孔底，边缘松散，面积较小。

“＋”红细胞沉于孔底，周围有轻微凝集小点。

“－”红细胞沉于孔底，呈园扣状，周边光滑整齐。

待检标本≥“＋＋”为阳性。

四、注意事项   

1. 红细胞浓度：致敏红细胞浓度与试验的敏感性和特异性有密切关系，在一定范围内，致敏红细胞浓度和血凝效价成反比，若浓度过的，则假阳性增高，过高则不敏感，一般认为1％～2％为宜。可根据自己的实验选择适当浓度。

2. 血凝板类型：血凝试验目前多采用微量方法，国内产生血凝板主要有U型和V型两种。血凝模型在很大程度上取决于血凝板的类型。阴性沉降模型V型板比U型板更为清晰典型；而敏感性则U型板比V型板高2～3个稀释度。

3. 用稀释棒须注意以下几点: A. 稀释棒久用后很难吸入待测血清，需用生理盐水预湿15min。 B. 稀释棒头空隙的标准容量为25μl，棒头前端只要接触血清，深入液面不超过1／2棒头，很快（1～2秒）血清即可充满棒头空隙而达到取样要求。若棒头插入血清过深，棒头部和颈部外侧粘有一定量的血清，影响结果的准确性。C. 棒头转动次数不得少于50次。

4. 血清标本：未完全凝固收缩而分离出的血清样本，吸血清时若吸入纤维蛋白块，明显阻止红细胞下沉，造成假阳性。

5. 血凝板使用后用10％过氧乙酸浸泡，常在孔底有变性蛋白沉积而出现假阳性，用15％安替福民（NaOCl）处理无假阳性。血凝板用旧后，特别是稀释棒反复旋转，使血凝板孔底出现环纹而出现假阳性。

五、应用范围    用于多种寄生虫病的免疫学诊断，如血吸虫病，肺吸虫病，脑囊虫病，华支睾吸虫病等。