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环卵沉淀试验(COPT)

【 作者:管理员     发布时间:2016-08-16 18:25 】

一、原理    COPT是利用抗原-抗体反应检测血清中抗体的一种免疫试验。当成熟虫卵内毛蚴的分泌、排泄物质与血吸虫病人血清中相应抗体结合后,在虫卵周围形成特异性沉淀物,即为阳性反应。在非血吸虫病人血清中因无相应抗体的存在,故在虫卵周围不出现特异的沉淀物,即为阴性反应。沉淀物的形成取决于虫卵内分泌、排泄物质透过卵壳微孔的速度和
透过部位的面积。
二、操作方法    先用融化的石蜡在洁净的载玻片两端分别划两条相距20mm的蜡线,在蜡线之间加受检者血清50~80μl,然后用针头挑取干卵约100~150个,加入血清中,混匀,覆以22×22盖玻片,四周用石蜡密封后,置于37℃温箱中,经48~72h后,用低倍(80~100×)显微镜观查反应结果,疑似者应在高倍(400×)显微镜下,加以鉴别。
三、结果判断及标准  典型的阳性反应为泡状、指状或细长卷曲的带状沉淀物,边缘较整齐,有明显的折光,泡状沉淀物须大于10μm(约相当2个红细胞大小)以上,才能定为阳性反应。阳性反应的标本片,应观察100个成熟虫卵,计算其环
沉率;阴性者必须看完全片;全片虫卵少于60个者要重做。
    阴性反应    虫卵周围光滑,无沉淀物,或有小于10μm的泡状沉淀物。
    阳性反应    反应强度和环沉率:
    “+”  虫卵周围出现泡状、指状沉淀物的面积,小于虫卵外围面积的1/4;细长卷曲的带状沉淀物小于虫卵的长径。
    “++”    虫卵周围出现泡状、指状沉淀物的面积,大于虫卵外周面积的1/4;细长卷曲的带状沉淀物相当于或超过虫卵的长径。
    “+++”  虫卵周围出现泡状、指状沉淀物的面积,大于虫卵外周面积的1/2;细长卷曲的带状沉淀物相当于或超过虫
卵长径的2倍。
环沉率=(阳性虫卵数/全片观察虫卵数)×100
    目前在基本消灭血吸虫病地区常以≥3%环沉率作为临床治疗血吸虫病患者的参考指标。
四、注意事项   
1.  划蜡线应待石蜡加热至开始冒烟时,用棉签蘸腊一次划成,以保持蜡线厚薄均匀,蜡线不宜过厚,线间距离不宜小于20mm。
2.  在实验血清中调入干卵数不能过多,以100~150个为宜;将干卵挑入血清后,必须使虫卵均匀分散,切勿成团块。
3.  宜用22×22盖玻片;通常采用重复一次蜡封盖玻片,以免密封不严,影响反应结果。
4.  检测基本消灭血吸虫病地区的人群时,虫卵孵育不宜低于72h,否则会影响检出率。
5.  应准确地掌握COPT的阳性反应标准。阳性反应的主要特征,即在卵周的沉淀物呈现明显的折光,必须识别这一反应特点。
6.  观察反应结果时,应先用低倍镜观察,见有疑似者,再用高倍镜识别。
7.  要善于区别粘附于卵周的红细胞、组织碎块及从卵壳破裂处渗出的毛蚴组织等。通常用高倍镜观察时,易于识别这些物质。
8.  观察反应结果时,计数100个成熟虫卵的反应,并计数环沉率。凡不成熟卵或破壳卵,不应计数。
9.  观察结果时,不宜过快,应仔细地识别每个成熟虫卵的反应情况。移动标本片时,要有规律性(如自左向右),以免漏
检阳性虫卵。
10.  检查完毕的标本片,可用3%来沙尔浸泡1~2天,待盖片脱开后,分别清洗、拭干备用。

五、应用范围    血吸虫病的免疫学诊断。

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