Establishment and preliminary application of PCR-RFLP genotyping method for Giardia duodenalis in goats

  十二指肠贾第虫（Giardia duodenalis，简称贾第虫）是一种全球性分布的人畜共患肠道原虫，常寄生在人类和多种哺乳动物（如山羊和绵羊）的小肠。本研究旨在基于限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP）PCR技术，建立一种简便、准确和特异的方法对羊群中常见的贾第虫A、B和E集聚体进行基因分型。

  首先，本研究使用引物对bgF1、bgR1、bgF2和bgR2通过巢式PCR扩增贾第虫β-giardin基因。随后，采用限制性内切酶Hinf I和Bgl I对PCR产物进行酶切消化。最后，采用所建立的PCR-RFLP方法检测并分析130份山羊粪便样本中贾第虫的集聚体类型，并同步与显微镜检查和核酸测序结果进行比较。测序及遗传序列分析结果确认所建立的PCR-RFLP方法能够准确区分贾第虫A、B和E集聚体，以及这三种集聚体的不同混合感染组合类型。在130份样本中，通过PCR-RFLP检测共发现26份样本（20.00%）呈贾第虫阳性，灵敏度高于显微镜检查的13.85%（18/130）。序列比对分析显示，在26份PCR阳性样本中，两份被鉴定为AI，其余24份被鉴定为集聚体E或亚集聚体E12。该试验建立了一种基于贾第虫bg基因序列的PCR-RFLP基因分型方法，具有准确、高效和快速的优点，能够在不进行测序的情况下准确识别和有效区分源于山羊的十二指肠贾第虫集聚体。

  该文发表于BMC Veterinary Research, 2024, 20(1): 527。

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